IDEXX RealPCR™

Convierta la fiabilidad de la PCR en una práctica analítica rutinaria utilizando las IDEXX RealPCR™

 

Con nuestro laboratorio central europeo de Biología Molecular Vet·Med·Lab ofrecemos los tests de PCR (IDEXX RealPCR™), así como una amplio conjunto de perfiles diagnósticos de PCR Real Time, que se pueden efectuar con una única muestra del paciente.

La PCR o reacción en cadena de la polimerasa es una técnica capaz de generar “in vitro” grandes cantidades de un fragmento determinado de DNA, con una secuencia específica, a partir de cantidades mínimas del mismo. En términos muy simples, podríamos decir que la PCR es una técnica que reproduce un segmento específico de DNA existente en una muestra hasta que se hace medible.

Los resultados de los análisis IDEXX RealPCR™ se obtienen normalmente a los pocos días de la recepción de las muestras, siendo los plazos de entrega más rápidos del mercado. Tanto el sistema cerrado de PCR Real Time, como el sistema de PCR convencional de IDEXX Vet·Med·Lab se someten a un estricto proceso de control y gestión constante de la calidad de acuerdo con nuestros estándares de acreditación (DIN ISO 17025, DIN 58967-60 y MIQ [Estándares de calidad para el diagnóstico microbiológico de enfermedades infecciosas]). Esto le garantiza la obtención de resultados fiables en los que puede confiar.

 
RealPCR™ Tests
 
¿Tiene alguna pregunta relacionada con el diagnóstico y la interpretación de resultados? Contacte con nuestra línea de asistencia científica, Tel. gratuito 900 100 966, opción 1, opción 3.

Rápida - Precisa - Eficiente

 

Ventajas de la IDEXX RealPCR™ :

  • La PCR Real Time es más rápida, más fiable y más precisa que la PCR convencional.
  • En la PCR convencional, una vez concluida la reacción, se debe transferir el DNA amplificado de la máquina de PCR y realizar una electroforesis en gel para visualizarlo. La extracción del producto de la PCR del tubo de reacción y la electroforesis en gel son procedimientos que requieren tiempo y que aumentan el riesgo de una posible contaminación con DNA externo que dé lugar a falsos positivos.
  • La PCR Real Time emplea una sonda marcada con un fluorocromo con una alta especificidad de unión al DNA diana que se va a amplificar. La fluorescencia que se produce es directamente proporcional a la cantidad de DNA diana disponible y la máquina de PCR la mide continuamente durante la amplificación. Tanto la amplificación como la detección tienen lugar a la vez en el mimo tubo de reacción. Este “sistema cerrado” reduce o prácticamente elimina el riesgo de contaminación por DNA externo y, por tanto, los falsos positivos, reduce el tiempo de análisis y hay una mayor rapidez en la obtención de los resultados.

Pautas para la obtención de las muestras para RealPCR™

 

Las pruebas de PCR ofrecen una modalidad de análisis versátil para enfermedades infecciosas. Sin embargo, la exactitud de los resultados depende, en cada manifestación clínica, de la obtención del tipo adecuado de muestra. A continuación se detallan los protocolos para cada tipo de muestra

Todas las muestras deben mantenerse refrigeradas, a menos que se indique lo contrario. Las muestras deberían ser obtenidas antes de aplicarse el  tratamiento antibiótico o antifúngico contra el organismo implicado. Es preferible que se reciban las muestras dentro de las 72 horas posteriores a su obtención, aunque la mayoría de las muestras se mantienen estables unos 10 días si se conservan refrigeradas, a menos que se indique lo contrario.

Sangre entera: 1 ó 2 ml de sangre entera en EDTA.

Heces: 5 gr. de heces frescas (1 gr. mínimo) en un contenedor estéril (preferiblemente) o en un contenedor vacío y limpio.

Orina: 2 ml. en un contenedor estéril.

Fluidos (LCR, efusiones pleurales, muestras de lavados respiratorios, fluidos uveales, líquidos ascíticos, aspirados de abscesos, etc.): 0,5 ml en un tubo estéril (preferiblemente en EDTA o tubo seco).

Aspirado de tejidos: Remitir los aspirados de tejidos en un hisopo (ver más adelante) mejora la estabilidad de la muestra. También son aceptables de 1 a 3 portaobjetos sin teñir (mantenidos a temperatura ambiente), aunque pueden implicar menor sensibilidad.

Protocolo recomendado:

  1. Aspirar el tejido con una jeringuilla empleando las técnicas estándar.
  2. Separar la jeringuilla de la aguja y, a continuación, llenar la jeringuilla de aire.
  3. Reinsertar la aguja en la jeringuilla y, seguidamente, expulsar el material aspirado sobre el extremo de un hisopo seco de plástico
  4. Remitir el hisopo en un tubo estéril vacío.

Biopsia de Tejido:  Las pruebas de PCR pueden ser realizadas sobre material histopatológico remitido con anterioridad (tejido fijado con formalina y parafinado). También se aceptan muestras de tejido fresco y refrigerado remitidas dentro de las 24 horas posteriores a su obtención.

Hisopos: Remitir hisopos secos y de plástico, sin medio de transporte, dentro de un tubo estéril y vacío. Las muestras respiratorias pueden consistir en un hisopo faríngeo profundo (con material orgánico visible en el hisopo, para lo cual es necesario frotar con firmeza), un hisopo conjuntival (limpiar el ojo e introducir el hisopo en el interior del párpado), o un hisopo nasal (por ejemplo, perfiles respiratorios o micosis sistémicas). Las muestras deben obtenerse con anterioridad a las tinciones de fluoresceína. En el momento de obtener un hisopo faríngeo, deben tomarse precauciones a fin de evitar que el animal muerda y/o ingiera parte del hisopo.

 

Perfil PCR Respiratorio Felino: ¿hay más de una manera de aplicar el hisopo a un gato?

Obtener muestras para el Perfil PCR Respiratorio Felino es sencillo. Para optimizar la sensibilidad diagnóstica de este perfil, se ruega remitir muestras de los orígenes indicados a continuación:

Materiales de obtención de las muestras:

  • Dos hisopos de plástico.
  • Tubos estériles vacíos.

Orígenes de las muestras:

  • Hisopo faríngeo profundo: frotar firmemente para asegurar que la materia orgánica recogida sea visible.
  • Hisopo conjuntival: limpiar el ojo e introducir el hisopo en el interior del párpado.

Envío de las muestras:

  • Colocar cada hisopo en un tubo estéril vacío. No poner los hisopos en medios de transporte.

 

Preguntas frecuentes sobre la PCR Real Time de IDEXX 

 

¿Qué es la PCR?

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es un proceso simple, pero preciso, que permite la producción virtualmente ilimitada de copias de material genético en el laboratorio.

 

¿En qué se diferencia la PCR Real-Time de la PCR convencional?

La PCR Real-Time es una variante más segura, rápida y eficiente. La PCR convencional conlleva más riesgo de contaminación cruzada, requiere más tiempo, y no permite una valoración cuantitativa de la calidad del DNA extraído de la muestra.   

 

¿Su prueba distingue entre vacunaciones e infecciones?

En el caso de la mayoría de vacunas inactivadas, la PCR Real-Time diferencia entre vacunación e infección. La PCR Real-Time no detecta la presencia de anticuerpos. Por consiguiente, un resultado positivo indica la presencia de un patógeno. Por esta razón, la PCR se asocia más fácilmente con la enfermedad. La detección de DNA/RNA viral puede producirse dentro de las primeras semanas posteriores a la vacunación con vacunas vivas modificadas, que es cuando el virus se está replicando. A fin de evitar la detección de DNA vacunal, es recomendable que, después de la última vacunación, hayan pasado al menos tres semanas.

 

¿Qué significa un resultado positivo o negativo?

Un resultado positivo confirma la presencia de un patógeno.

Un resultado negativo significa: que el patógeno no está presente; que está por debajo del límite de detección; que no es detectable por la PCR actual; o bien que la calidad de la muestra es baja.

 

¿Cuál es el límite de detección?

El límite de detección de una determinada técnica se define de diferentes maneras. La definición más aceptada es la concentración de ácido nucleico diana, o el número de moléculas que todavía pueden ser amplificadas en el 95% de las pruebas.

 

¿Qué son la sensibilidad y la especificidad de una prueba diagnóstica?

La sensibilidad diagnóstica indica la probabilidad de un resultado positivo real dentro de una población ya confirmada como positiva. En otras palabras, una sensibilidad elevada significa una mayor probabilidad de que se identifiquen correctamente todas las muestras positivas y de que no se produzcan errores en el diagnóstico.

La especificidad diagnóstica indica la probabilidad de un resultado negativo real dentro de una población ya confirmada como negativa. Una especificidad elevada representa la probabilidad de que la prueba detecte realmente aquello que se está testando, y no algo diferente. Por lo tanto, una alta especificidad aumenta la probabilidad de que un resultado positivo sea debido a un patógeno.

 

Si una prueba da un resultado negativo, pero aún así se mantiene la sospecha de infección, ¿cuánto tiempo debe esperarse para repetir la prueba?

Todo depende de la presencia, o ausencia, de síntomas clínicos, del supuesto patógeno, y de la técnica empleada. Por lo general, se recomienda un tiempo de espera de dos a cuatro semanas.

 

¿Se debería realizar alguna prueba confirmatoria adicional junto con la PCR?

Sí. La PCR es un procedimiento diagnóstico complementario, y debería realizarse en paralelo con otras pruebas. En función del patógeno, éstas podrían consistir en: un análisis de sangre completo, una serología, pruebas de detección de antígenos (tales como los  Tests SNAP®), etc.

 

¿Cuánto tiempo pueden conservarse las muestras en el frigorífico?

Las muestras pueden ser conservadas en refrigeración (4º C) hasta un máximo de tres días (durante el fin de semana).

 

¿Cómo deben guardarse las muestras?

Los fluidos (líquidos abdominales o pleurales, sangre entera, heces) y los hisopos pueden guardarse durante tres días (el fin de semana) en refrigeración a 4ºC.

Los tejidos frescos deberían remitirse refrigerados en un plazo de 24 horas. Los tejidos pueden conservarse en congelación (-20ºC) durante una semana. Los tejidos parafinados son también aceptados.

 

¿Cómo deben enviarse las muestras?

Si se envían a través de un servicio de mensajería, las muestras pueden enviarse conjuntamente con el resto de muestras para el laboratorio. Deben enviarse las muestras dentro de sobres acolchados aislantes y con conservantes de frío.

 

¿Cuánto tiempo se conservan las muestras después de su procesado?

Las muestras se conservan durante los tres días posteriores a su recepción para su reanálisis. El DNA extraído se preserva durante un año por si fuera necesario realizar pruebas suplementarias posteriores.

 

¿A quién se puede recurrir en caso de dudas o consultas?

Para más información sobre los perfiles y las pruebas individuales de IDEXX RealPCR™, pueden contactar con los asesores médicos veterinarios de los Laboratorios de Referencia IDEXX en el teléfono gratuito 900 100 966, extensión 1, extensión 3, los cuales les ayudarán a solventar cuestiones tales cómo cuándo emplear las pruebas de PCR, cómo interpretar los resultados y recomendaciones terapéuticas.

 

¿Qué pruebas RealPCR™ hay disponibles?

Puede consultar en el apartado de directorio de pruebas, todas las pruebas disponibles.

 

¿Pueden solicitarse análisis adicionales después de que la muestra ya haya sido procesada?

Las muestras originales se conservan durante tres días.  Sin embargo, el DNA extraído se almacena durante un año. Se pueden realizar pruebas adicionales sobre el DNA almacenado en caso de solicitarse. Por ejemplo, si en un principio sólo se solicitó una PCR de moquillo, se podría realizar sobre el DNA almacenado un perfil respiratorio canino completo, siempre y cuando la muestra original fuera un hisopo conjuntival o faríngeo, pero no sangre entera.

 

¿Cuál es el tiempo de respuesta de las muestras enviadas a su laboratorio?

Las pruebas PCR se procesan diariamente, de lunes a viernes, para todos los patógenos. Los resultados suelen estar disponibles a los 3-5 días laborables desde su recepción en el laboratorio. Las muestras recepcionadas en sábado se empiezan a procesar el lunes.